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區塊鏈是什么？“區塊鏈是分布式數據存儲、點對點傳輸、共識機制、加密算法等計算機技術的新型應用模式。”看完以后，你可能還是一臉懵逼。其實用大白話來說，區塊鏈就是一種去中心化的分布式賬本數據庫。這種分布式賬本的好處就是，買家和賣家可直接交易，不需要任何中介。人人都有備份，哪怕你這份丟失了，也不受影響。舉個例子：比如說小花找小草借一百塊錢，但小草怕他賴賬，于是就找來村長做公證，并記下這筆賬。這個就叫中心化。但如果，你不找村長，直接拿一個喇叭在村里大喊“我h草借給王小花一百塊錢!請大家記在賬本里”，這個就叫去中心化。以前村長德高望重，掌握全村的賬本，大家都把錢存在他這里，這是過去大家對中心化的信任。現在，大家都擔心村長會偷偷挪用大家的錢，怎么辦呢?于是大家就給每個人都發了一本賬本，任何人之間轉賬都通過大喇叭發布消息，收到消息后，每個人都在自家的賬本上記下這筆交易，這就叫去中心化。有了分布式賬本，即使老張或老李家的賬本丟了也沒關系，因為老王、老林等其他家都有賬本。每天，大家都會在公認的賬本后面添加新的交易，而且其他人也會參與驗證當天的交易。最后那個公認的賬本也只會增加，不會減少。后續加入的成員都會從最長的那個賬本那里繼續記錄。什么是公鏈?公鏈即區塊鏈世界的“操作系統”，是為區塊鏈生態提供數據儲存、網絡傳輸、交易計算、共識機制等的底層協議。公鏈提供的接口，則可供開發者研發基于此公鏈的應用。公鏈的發展階段:第一代公鏈即比特幣。其設計定位為單純的支付渠道，安全性極高，但可擴展性差，許多高級應用無法建立。第二代公鏈即以太坊。它允許開發者自行開發各種智能合約，從而拓展了區塊鏈的商業用途。目前，以太坊上的去中心化應用（DAPP）已達1300多個，但是因為擴展性不足、安全性差、開發難度高、依賴手續費等問題，以太坊的商業應用遭遇了瓶頸。第三代公鏈的定位是要實現大規模商用，即所謂區塊鏈3.0時代。GEC屬于3.0技術，GEC技術已經超越比特幣//以太坊！幣圈咨詢：1，什么是區塊鏈？簡單來說，去中心化，公平公正公開，不可篡改，可溯源，共識記賬等特性。2，什么是公鏈？公鏈是一種技術，不是幣。比如比特幣以太坊，柚子，GC、EC等。3，什么是代幣？比如大家玩的各種幣98/%都是代幣，上交易所破發的或者還沒上去的就沒有的，有的甚至代幣都不是。4，代幣怎么來的？代幣大部分都是基于以太坊的技術，也就是用以太坊的技術開發出來的（成本幾萬塊錢就可以搞定），可以理解為ETH生出來的兒子。5，BTC,ETH,EOS、GEC又是什么？BTC是比特幣這條公鏈的原生幣，ETH是以太坊這條公鏈的原生幣，EOS是柚子這條公鏈的原生幣。GEC是GC這條公鏈的原生幣，開發一條公鏈的時間大概在8到12個月。成本在8千萬到一個億。全球2000多種幣，只有20到30種公鏈。而GEC環保生態系統就有兩條，即公鏈GC環保鏈和公鏈EC創業鏈。6，什么幣才有長久投資價值？當然是公鏈的原生幣，因為只有它才可以孵化企業應用，企業開發代幣是需要技術的，那么就應用到公鏈的技術。當然投資公鏈的原生幣不是一天兩天，需要陪它一年兩年，BTC漲了2600萬倍，8年前買一塊錢，也有一個億，ETH以太坊4年前買1萬塊錢現在也有5000萬。真正的好幣是需要時間沉淀的。7，2019年區塊鏈的價值在哪里？公鏈的應用。當然也有聯盟鏈，私有鏈，價值比較小。所有區塊鏈越來越靠近實體應用，傳統人投資。至此，gec的價值立現，親，你看懂了嗎？什么是冷錢包？冷錢包是指由提供區塊鏈數字資產安全存儲解決方案的信息技術公司研發的比特幣存儲技術。冷錢包集數字貨幣存儲、多重交易密碼設置、發布最新行情與資訊、提供硬分叉解決方案等功能于一身，且運用二維碼通信讓私鑰永不觸網，能有效防止黑客竊取。GEC是怎樣的貨幣？世界環保創業幣簡介：世界環保創業基金會于2015年在香港成立，致力于通過贊助環保創業項目，支持世界環保行業發展，從而可持續地促進解決世界環境問題。2016年我們將基金會總部遷到了日內瓦，通過“項目資助”、“機構資助”、“大學生綠色大使計劃”等形式，為有志于環保創業的青年領導者提供綜合能力建設，與社會各界人士一起支持環保，教育及呼吁公眾支持及參與社會環境改善，共同探索未來環境保護發展的方向，努力建設一個綠色地球。面對日趨嚴重的環境污染及天然資源短缺的問題，世界環保創業基金會，承諾為關心和熱愛環境、并且愿意為之創業的青年人及企業提供更多嘗試的機會，以實際行動推動世界有序發展。2017年我們推出一個基于區塊鏈技術的數字貨幣的項目：環保創業幣（Green entrepreneurship coin），從發行之日2017年2月17日初始發行價0.01美金，截止2019年5月6日運行，GEC系統社區全球會員量超過400萬，全球免費送1000萬礦機，每個GEC價值超過25美金，即人民幣乘以7等于175元以上。2018年9月1日我們推出了環保鏈（幣）GC。使用區塊鏈的公開透明、不可篡改特性，通過全球生態環保體系、世界公共認證體系、全球化數據共享體系、源/(點/)追溯系統、公眾所有權分配制五大體系的應用，打造全球化的公鏈系統，讓環境保護有跡可循，形成一個由全球公眾監管的環保生態體系，實現真正的綠色生活，綠色創業。GC的獲得是由GEC系統社區會員使用GEC置換獲得，按照GEC系統社區1,346,836.00位會員共同投票通過的置換規則進行置換，于2018年8月20日-2018年8月30日進行投票，2018年9月1日正式啟動GC原始權益置換，至2018年12月19日結束GC原始權益置換。GC系統正式啟動，權益置換完成后將同步上線多個國家的交易平臺，并逐步開放GC各應用端口，讓全球的個人、企業及政府都能使用Green Chain/(環保鏈/)，更好的發展全球環境保護事業，讓環境保護有跡可循，公開透明，推動全球各個領域的生態環保系統建設，打造一個全球化的生態環保體系目前GC環保鏈已上五國際交易所，后面繼續陸陸續續上更多國際交易所。GEC帳戶是可繼承的GEC不只是單純的數字貨幣一個基礎鏈GEC；公有鏈GC和EC；三大體系（生態、價值、價格）；四大系統（全球化數據共享、源（點）追溯、世界公共認證、全球生態環保）。GEC是全球三大基礎鏈之一:全球共有三種基礎鏈/(比特幣，以太坊GEC/)，我們GEC就是其中之一。GC和EC是全球三十多種公有鏈當中的其中兩個:也就是說全球一共不過三十多種公有鏈，其中就有GC和EC，知道GEC的厲害了吧！自從GEC沖高150美元（1050元）回落回調，在40～50美元之間已經橫盤震蕩整理，換手三個多月了，而且多次上沖50、60、70美元整數位，一旦成功突破坐穩70美元整數關口，下個目標位，有待見證！！！平均每月10$上漲也是很舒服！！春節前后，GEC必然再創新高的！2019年很快就過去了，互聯網很多項目都是跑路賠錢的！！很多互聯網難民快速加入GEC，其中一些即沒賠錢也沒賺錢的投機群體一定會好好抱住GEC的，不然明年春節都沒法見爹娘了。2020年春節GEC必漲行情即將開始！！投資加倉的都要快點了！！500多元到千元很快的每人都試試，幾十萬下來（只是房子首付），是不是第二年可以全款買房？至于想不想買房自己決定的！！也許還想再等一年，買別墅呢？GEC的綠色環保理念與史命，注定了它作為真正區塊鏈第三代數字貨幣的貴族身份，將會逐一秒殺其它數字貨幣而成為在全世界流通的真正意義上的區塊鏈數字貨幣。一個商機，百年不遇，一個夢想，驚天動地，一個平臺，創造奇跡，一次相信，終身受益，幾何倍增，改天換地，區塊鏈經濟的時代將要改變整個世紀，2019不是你沒錢可賺，而是你不在賺錢的圈子里。選對項目才是最重要的，選擇GEC環保創業幣將會給你一個不一樣的未來！我一直在GEC等你免費注冊https:////gec.ve-china.com.cn//public//register//?s=jdbbd/&l=zh-cnGEC中文版登錄網址:https:////gec.ve-china.com.cn//index//index//?l=zh-cnGEC注冊認證操作流程各位GEC新老朋友要注意了您推薦的新人注冊時首先準備好四張照片1、身份證正面（貼好（GEC認證專用）小紙條2、身份證反面（貼好（GEC認證專用）小紙條3、手持身份證E手勢（身份證上貼好（GEC認證專用）小紙條4、右手E字型一、先把推薦人的二維碼或注冊鏈接（在公會招募里）發給您所推薦的新人二、注冊時準備好兩組密碼/  /  /  /  登錄密碼:/  /  /  /  安全密碼:三、上傳資料、照像時保證身份證上字能看清楚四、等待審核，一般24小時之內審核成功五、成為GEC礦工后，第一時間申請環保志愿者，以便你推廣得到收益。 /  /  /  /  /  /  /  /  /  /  /  /  /  / / 六、每24小時結算一下，一個月不登錄系統將凍結帳號/  /  / （請將資料收藏好傳下去）

Co-IP是檢測分子間相互作用的常用技術，德泰發現有很多實驗人員反映在查看論文文獻的過程中，遇到Co-IP實驗結果圖不知道如何進行分析。本文從不同的文獻中找了四個Co-IP的結果圖，用案例的方式對如何分析Co-IP實驗結果圖進行介紹。 Co-IP結果如何看？ 首先需要說明的是，熟悉了解免疫共沉淀實驗的原理及實驗的操作流程是進行Co-IP結果圖分析的前提。在清楚知道Co-IP操作流程的前提下，弄清楚圖中各個部分所代表的實驗步驟，結合圖中展示的結果進行分析，便可以看懂Co-IP的實驗結果圖。 Co-IP結果分析案例一 該圖為驗證蛋白EDR1與蛋白EDR4之間是否存在相互作用的結果圖。由圖中可以得到，蛋白EDR4帶有GDP標簽，蛋白EDR1帶有FLAG標簽，該實驗為利用蛋白標簽來沉淀和檢測蛋白；該co-ip實驗實驗被分為兩組，第一組存在GFP標簽及EDR1-FLAG蛋白，第二組存在EDR4-GFP蛋白及EDR1-FLAG蛋白；圖中共有三組膠圖，分別是Inut組，IP組，以及CO-IP組。基本情況得到之后，開始進行分析： 觀察圖片的順序為Co-IP實驗操作順序相同。首先觀察Input組，即陽性獨照組。第一塊膠圖為利用anti-FLAG沉淀FLAG標簽，發現兩個條帶都在130kd處有蛋白，說明兩組實驗都存在EDR1-FLAG蛋白且其大小為130kd，第二塊膠圖為利用anti-GFP標簽沉淀GFP標簽，發現第一條帶在25kd存在蛋白而第二條帶在130kd存在蛋白，說明第一組實驗存在GFP標簽，且大小為25kd，第二組實驗存在EDR4-GFP蛋白且大小為130kd。隨后觀察IP組，該組圖表示的是利用anti-FLAG對EDR1-FLAG蛋白進行沉淀，圖上顯示兩組實驗在130kd都存在蛋白，說明兩組實驗的EDR1-FLAG被沉淀下來。最后觀察CO-IP實驗組，該組圖表示在IP組的基礎上進一步利用anti-GFP檢測GFP標簽，圖上顯示第一組實驗沒有條帶，而第二組實驗在130kd處有蛋白。說明IP組沒有把GFP標簽共沉淀下來，但是把EDR4-GFP蛋白共沉淀下來了。說明EDR1-FLAG蛋白不能與GFP標簽相互作用，但是可以與EDR4-GFP蛋白相互作用，由此可得到結論：EDR1蛋白可以與EDR4蛋白存在相互作用。 Co-IP結果分析案例二 該圖為驗證蛋白ChREBP與蛋白HDAC1之間是否存在互作的結果圖。蛋白ChREBP帶有FLAG標簽，蛋白HDAC1帶有Myc標簽。該實驗是利用標簽抗體去沉淀及檢測帶有標簽的蛋白。該實驗共有三組，第一組為加Myc-HDAC1不加FLAG-ChREBP，第二組為加FLAG-ChREBP不加Myc-HDAC1，第三組為兩個都加。實驗共有四張膠圖，分別為IB：Myc、IB：FLAG（這兩張膠圖為陽性對照），IP：FLAG IB：FLAG（IP組），IP：FLAG IB：Myc（Co-IP組），基本情況得到之后，開始進行分析： 最下面兩個膠圖為利用IB驗證Myc-HDAC1及FLAG-ChREBP存在的陽性對照。第二張膠圖表示的實驗操作是利用anti-FLAG沉淀FLAG-ChREBP蛋白，圖上顯示經IB驗證第二、第三組FLAG-ChREBP蛋白被成功沉淀下來，而第一組沒有結果（第一組不存在FLAG-ChREBP蛋白）。第一張膠圖表示在anti-FLAG沉淀FLAG-ChREBP蛋白的基礎進行IB檢測驗證Myc-HDAC1蛋白是否存在。圖上顯示第一、第二組實驗沒有檢測到（第一組不存在FLAG-ChREBP蛋白，第二組不存在Myc-HDAC1蛋白），但是第三組實驗檢測到了Myc-HDAC1蛋白。由此可以得到結論：兩個蛋白都存在的時候，當FLAG-ChREBP蛋白被沉淀，Myc-HDAC1蛋白也會被共沉淀下來，ChREBP蛋白與HDAC1蛋白之間存在相互作用。 Co-IP結果分析案例三 該圖為驗證蛋白X與蛋白Y是是否存在相互作用的結果圖。由圖可以發現，該實驗被分為兩組：input組及IP組，有兩塊膠圖，第一塊是IB驗證蛋白X的存在，第二塊是IB驗證蛋白Y的存在。由對照組的條帶可以得到結論：蛋白X與蛋白Y都是存在的。IP組的第一個條帶表示利用IgG進行沉淀實驗，結果蛋白X與蛋白Y沒有被沉淀下來，說明蛋白X、蛋白Y不能與IgG結合（陰性對照，用于排除蛋白與抗體非特異性結合的可能性）；IP組的第二條帶表示利用蛋白X進行沉淀實驗，結果蛋白X被沉淀下來，蛋白Y也被沉淀下來，由此得到結論：蛋白X-蛋白Y之間存在相互作用。 Co-IP結果分析案例四 該圖為驗證CAT3蛋白與CPK8蛋白之間存在相互作用的結果圖。由圖可以得到，兩個蛋白分別加了標簽，利用標簽進行蛋白的沉淀及檢測。實驗共分三組，第一組為存在GFP-CAT3，不存在cMyc-CPK8；第二組為存在cMyc-CPK8不存在GFP-CAT3，第三組為兩個都存在。實驗共有兩組膠圖，一組為陽性對照組（Input組），另外一組為實驗組（Output組）。由Input組可以得到結論：三組實驗中的組分都是正確的。分析Output組發現：anti-cMyc在第二、第三條泳帶都有，而anti-GFP只有第三條帶有蛋白，由此推測實驗組的實驗操作為利用anti-cMyc進行沉淀實驗，在利用IB檢測GFP-CAT3的存在。從實驗組第三條帶可以發現當cMyc-CPK8蛋白被沉淀下來時GFP-CAT3蛋白也會被共沉淀下來，由此得到結論：cMyc-CPK8蛋白與GFP-CAT3蛋白存在相互作用。 Co-IP和GST pull-down的區別 Co-IP和GST pull-down都是用于檢測蛋白相互作用的實驗，兩者有很多相似之處，如只能檢測強相互作用、只能定量分析、不能檢測瞬時相互作用等。同時兩者在原理及實驗操作上也存在一定的區別，下文就Co-IP和GST pull-down在原理及操作流程上的區別做一簡述。 Co-IP和GST pull-down原理區別 GST pull-down方法的基本原理是：利用重組技術將探針蛋白與GST融合，融合蛋白通過GST與固相化的載體上的GTH親和結合。因此，當與融合蛋白有相互作用的蛋白通過層析柱時或與此固相復合物混合時就可被吸附而分離。 GST pull-down實驗原理圖 Co-IP實驗原理圖 免疫共沉淀（Co-IP）原理為用某一蛋白的抗體，在細胞裂解液中與相應的蛋白（誘餌蛋白）結合，用Protein A//G將抗原抗體復合物拉下，最后在拉下的復合物中檢測是否存在與誘餌蛋白相結合的目的蛋白。 Co-IP和GST pull-down實驗操作區別 Co-IP實驗為體內實驗條件，蛋白質的相互作用可以在天然狀態下進行，其優點為可以避免人為影響，還可以分離得到天然狀態下相互作用的蛋白復合體，缺點是無法證明兩個蛋白之間是直接的相互作用還是間接的相互作用；GST pull-down實驗為外實驗條件，可以去除其它蛋白的影響，從而確定目的蛋白和待檢測蛋白是否可以發生直接相互作用。但由于其實驗條件為非天然條件，可能會使實驗結果出現假陽性，即因為電荷作用的影響造成的吸附，而不是生理性的相互作用。 /  Co-IP GST pull-down 定性//定量檢測 定性 定性 相互作用方式 直接或間接 直接 實驗條件 體內 體外 蛋白是否需要加標簽 否 是 是否需要抗體 是，目的蛋白和誘餌蛋白的抗體 是，目的蛋白抗體，用于WB檢測

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